Експрес-метод аналізу білків казеїнового комплексу молока

Abstract

На сьогоднішній день відкрито цілий ряд біологічно активних, пептидів, котрі, власне, утворюються в процесі протеолізу різноманітних казеїнових фракцій. Дослідження і використання цього білкового комплексу, глибоко пов'язане з потребою їх оперативного визначення. Відповідно, метою рoботи є рорзробка електрофоретичної системи для визначення за малі проміжки часу oкремих фракцій при серійних дослідженнях і розділенні казеїнового комплексу. Аномальні особливості реакції казеїнів з додецилсульфатом натрію та значення молекулярних мас, що незначно відрізняються, відповідно, за основу було взято систему електрофорезу анодного типу в однорідному поліакриламідному гелі. В цій системі досліджувані казеїни розділяються по зарядах та встановлюються на електрофореграмі у повній відповіднос ті із теперішьою класифікацією. В якості дезагрегуючого агенту до вмісту гелю додається сечовина. На основі аналізу результатів досліджень у виготовленому в лабораторії приладі типу Стадієра із формою електрофоретичної камери змінного типу були встановлені умови швидкого визначення фракцій казеїнового типу. При цьому змінено склад гелевих речовин з включенням 6,6 М сечовини, 3,3% ПААГ та 0,03 М трис-НСІ буферу, pH якого збільшено до 8,3. Термін фарбування скорочено до 1,5 хв. Все це забезпечило можливість вже за 45 хв. визначати всі основні фракції казеїнів. Методика може бути корисною для оперативного визначення фракцій казеїну та при експрес-аналізі натуральності молока і протеїнових молочних продуктів. В такій системі стандартна електрофореграма казеїну суттєво відрізняється від тієї, яка є власне характерною для протеїнів бобів сої.

On to date, tens of active biologically formed peptides during proteolysis of various factions of casein are discovered. Taking into attention the complicate nature of heterogeneity of casein the investigations and using this protein complex are closely connected with the necessity of its identification rapid. Therefore, the aim of work is the creation of an electrophoretic system for rapid check of fractions in the studies serial and at the isolation of the casein complex from milk. “Given the anomalous nature of the nteraction of the sodium dodecyl sulfate with caseins and close of their molecular masses values the electrophoresis anode system in a polyacrylamide homogeneous gel was taken as la basis”. In such a system all caseins are according to their charge separated and on electrophoregram in accordance with the modern classification are located. Urea was only added in gel as disaggregating agent. During investigations on the device manufactured in the laboratory such as variable Stadiera form of the electrophoretic chamber it was established conditions for the rapid identification of casein fractions. The modified gel composition includes: 6.6 M urea, 3.3% SDS and 0.03 M Tris-HCl buffer with increased pH value to 8.3. Staining time is reduced to 1.5 min. Such changes allow fulfilling identification of the main fractions of ^casein during 45 min. This technique may be useful for the quick identification fractions of the casein at their allocation, research, as well as at the rapid analysis of natural milk protein and milk products. In this system the typical electrophoregrams of casein are significantly different from that which characterize soybean proteins.